Service - Synthèse sur commande de peptides - Informations techniques

Informations techniques

Les peptides GeneCust sont obtenus par synthèse en phase solide à l'aide de la chimie Fmoc. Nous pouvons obtenir plusieurs centaines de peptides à l'aide de la synthèse automatique. GeneCust offre un large éventail de niveaux de pureté, de quantités et de modifications des peptides, selon la demande du client. .

Comment cela fonctionne-t-il ?

Les peptides sont synthétisés chimiquement par le biais de la stratégie Fmoc. Développée à la fin des années 1970 et révisée en 2000, la chimie Fmoc est la méthode préférée pour la synthèse des peptides en phase solide. Elle implique l'assemblage de la chaîne peptidique pas à pas, à raison d'un acide aminé à la fois, tout en étant fixée sur un support de résine insoluble. De cette manière, les sous-produits réactionnels peuvent être lavés à chaque étape. Elle utilise des groupes de protecteurs octogonaux comme le groupe Fmoc (9-fluorénylméthoxycarbonyle) qui protège l'extrémité amino des acides aminés.

Cycle de la synthèse

Au cours de la synthèse en phase solide, l'acide aminé à l'extrémité C-terminale du peptide concerné doit être relié à un support insoluble via son groupe carboxyle. Ensuite, le groupe de protection du groupe amino est éliminé. Un excès d'acide aminé secondaire est introduit. Après le couplage, le réactif en excès est éliminé par lavage et les groupes de protection sont éliminés de l'extrémité N-terminale du peptide de manière à permettre l'addition du troisième acide aminé. Ce processus se répète jusqu'à ce que la séquence souhaitée soit obtenue. Ci-dessous, le détail des 4 étapes :

  • Etape 1 Charge de résine : la première étape consiste dans l'addition du premier acide aminé au support solide par son extrémité C-terminale via une liaison ester ou amide en fonction du type de l'extrémité C-terminale (acide ou amide). Après le couplage, les groupes hydroxyle non réagis de la résine sont protégés par de l'anhydride benzoique ou de l'anhydride acétique.
  • Etape 2 Libération de l'amine (déprotection Fmoc) : le groupe de protection Fmoc est éliminé est appliquant un traitement bref de 20 % de pipéridine en DMF (diméthylformamide). La réaction est achevée en 10 minutes.
  • Etape 3 Réaction de couplage : un excès important d'acides aminés est utilisé (environ 2 à 10 fois la capacité de la résine). Les extrémités de ces acides aminés sont activées par leurs groupes carboxyle de manière à former des liaisons amide ou ester. Ceci est souvent rendu possible en utilisant des réactifs de couplage (PyBOP, TBTU ou HBTU). L'excès d'acides aminés implique un excès de réactifs (en général 60-200 mM) fin de garantir une diffusion efficace. Le temps nécessaire pour une acylation complète dépend de la nature du résidu activé, de la séquence peptidique liée à la résine et de la concentration des réactifs.
  • Etape 4 Clivage final : L'acide trifluoroacétique (TFA) est largement utilisé pour le clivage du peptide par rapport à la résine et pour l'élimination des groupes de protection des chaînes latérales.
TFA

Purification

Un large éventail de degrés de pureté est disponible :

  • • Peptides bruts
  • • Peptide Immunograde (pureté >75 %) : le peptide grossier est précipité et lavé plusieurs fois pour une extraction complète d'impuretés organiques et pour l'élimination de produits secondaires. De même, une étape CLHP standard est appliquée. Le degré de pureté est généralement suffisant pour le test ou la production d'anticorps.
  • • Peptides purifiés (pureté >85 %) : des purifications supplémentaires par CLHP permettent d'éliminer les peptides produits pendant les réactions de couplage incomplètes, les peptides qui ne présentent pas un ou plusieurs acides aminés. La pureté supérieure à 85 % peut être utilisée pour la production d'antisérum, le titrage d'anticorps par ELISA et pour la production d'anticorps monoclonaux.
  • • Peptides hautement purifiés (pureté > 95 %) : ce degré de purification est nécessité pour la plupart des études biologiques ou enzymatiques.

Pour un niveau de pureté supérieur à 98 %, merci de nous envoyer une demande d'informations.

Contrôle de qualité

GeneCust propose des peptides de haute qualité, produits par des experts et livrés avec tous les documents nécessaires :

  • • HPLC Chromatogramme CHLP
  • • Spectrométrie de masse
  • • Rapport de synthèse